谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒
分类: 最上层  发布时间: 2018-03-24 13:14 

谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒
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货号: ZDK-010Z
保存条件: 2-8℃
保质期: 1年
数量: 大量
规格: 100T
谷胱甘肽过氧化物酶(GSHpx)检测试剂盒
 
产品编号:ZDK-010Z                                    规格:100T
该产品由军事医学科学院研发监制
 
一、原理
 
GSHpx活力以单位时间内催化GSH氧化减少的量来表示,GSH和DTNB反应可生成黄色的阴离子,测定该离子的浓度,既可计算出GSH减少的量。由于GSH能进行非酶反应氧化,所以最后计算此酶的活力时,必须扣除非酶反应引起的GSH减少。
 
二、检测范围
 
组织、细胞、血清、血浆
 
三、试剂组成
 
A.   叠氮钠磷酸缓冲液         40ml
B.   偏磷酸沉淀液贮存液       200ml
C.   Na­­­­­­­­2HPO溶液               150ml
D.   GSH                      9.21mg
E.   30% H2O                  0.5ml
F.   柠檬酸三钠溶液           30ml
G.   DTNB                     10mg
 
三、试剂配制
 
A.   1.0mM GSH溶液:使用当日按需要量用叠氮钠磷酸缓冲液配制。取GSH3.07mg, 加叠氮钠磷酸缓冲液10ml,为1.0mM GSH溶液。
B.   1.5mMH2O2溶液: 使用当日按需要量用30% H2O 用双蒸水配制。取30% H2O 15µl,双蒸水定容至100ml(自制)。
C.   0.4mg/ml DTNB显色液:按需要量用柠檬酸三钠溶液配制,4℃冰箱内可保存一月。DNTB 10mg ,加入25ml柠檬酸三钠溶液为0.4mg/ml DTNB显色液。
 
四、GSH标准曲线的制作
 
    配制标夜
GSH(µm)              0        20      40       60       80      100
1.0mMGSH  (ml)     0       0.05     0.1      0.15     0.2     0.25
偏磷酸沉淀液 (ml)   2.0     2.0      2.0      2.0     2.0      2.0
双蒸水 (ml)         0.5     0.45     0.4      0.35    0.3      0.25
取上述标液0.4ml,加入Na­­­­­­­­2HPO溶液0.5ml,再加入DTNB 0.1ml,混匀。于5min内用412nm比色,以双蒸水调零。
 
五、测定步骤
 
取样品液(如:人血20µl或鼠血10µl)10ul或20ul,双蒸水稀释至1.0ml,4小时内测定活力。
(注:血浆、血清直接作为样品液操作本步骤,组织需要10%匀浆后10000转/份离心20分钟后去上清。)
 
1.  测定步骤
                   样品管           非酶管          空白管
1.0mM GSH           0.2 ml            0.2 ml             /
血样                0.2 ml              /                /
双蒸水               /                0.2 ml             /
37℃水浴5min
H2O2(37℃预热)        0.1 ml             0.1 ml            /
37℃准确反应5min(人血)或3min(鼠血)
偏磷酸沉淀液         2.0 ml              2.0 ml           /
3000rpm离心10min
取上清夜             1.0 ml               1.0 ml          /
双蒸水                /                     /            0.2 ml
偏磷酸沉淀液          /                     /            0.8 ml
Na­­­­­­­­2HPO溶液           1.25 ml              1.25 ml        1.25ml
DTNB显色液           0.25 ml              0.25 ml        0.25ml
­反应1min后,412nm比色,读取OD值。依据标准曲线计算浓度。
 
六、保存
 
    于2-8℃保存1年。
 
 
 
 
 
 
 
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温馨提示:不可用于临床治疗。
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