His标签融合蛋白纯化试剂盒
分类: 最上层  发布时间: 2018-03-24 13:14 

His标签融合蛋白纯化试剂盒
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货号: ZDK-008Z
保质期: 1年
数量: 大量
保存条件: 2-8℃
His标签融合蛋白纯化试剂盒说明书
 
产品编号:ZDK-008Z                                         规格:4ml
该产品由军事医学科学院研发监制
一、原理
含有多聚组氨酸的蛋白质或多肽可以与Ni2+螯合物结合,用适当的缓冲液冲洗去除杂蛋白后,再用可溶性竞争性螯合剂咪唑洗脱回收含有多聚组氨酸的靶蛋白。
二、试剂
A.       层析柱                1根                      
B.  Ni2+螯合琼脂糖凝胶4B   4ml
C.  硫酸镍                5g     
D.  咪唑                  6g      
E.  EDTA                  10g
三、纯化方法
1.取2ml Ni2+螯合琼脂糖凝胶4B装柱,凝胶自然沉降。
2.用5倍柱床体积的水洗层析柱,再用5倍柱床体积的结合缓冲液(20mmol/L磷酸盐缓冲液,500mmol/L NaCl,pH 7.8)平衡层析凝胶柱。
3. 将适量细胞裂解液(20mmol/L磷酸盐缓冲液,500mmol/L NaCl,pH 7.8)12000g离心,取上清,上样,流速为0.1ml/min。
4.用5-10倍柱床体积的结合缓冲液洗层析柱,流速0.1ml/min。
5.分别用含不同浓度咪唑的洗脱缓冲液进行分段洗脱,流速0.1ml/min,收集各洗脱峰。(咪唑的浓度一般为10、20、50、100、150、200mmol/L,依据不同融合蛋白而不同)。
6.SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析组氨酸标签融合蛋白纯度。
四、再生
1.用2倍柱床体积的0.2mol/L乙酸洗层析柱,再用5倍柱床体积的水洗层析柱。
2.用5倍柱床体积50%乙醇层析柱,再用5倍柱床体积的水洗层析柱。
3.用5倍柱床体积的0.1mol/L EDTA洗层析柱,再用5倍柱床体积的水洗层析柱。
4.用2倍体积的0.1mol/L 硫酸镍洗层析柱,再用5倍柱床体积的水洗层析柱。
五、保存
2-8℃下保存一年。
 
 
 
 
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温馨提示:不可用于临床治疗。
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