端粒酶检测试剂盒
分类: 最上层  发布时间: 2018-03-24 13:14 

端粒酶检测试剂盒
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货号: ZDK-006Z
保存条件: -20℃
数量: 大量
保质期: 6个月
规格: 20T
端粒酶活性检测试剂盒说明书
 
产品编号:ZDK-006Z                                          规格:20T
该产品由军事医学科学院研发监制
一、试剂组成                                                                                                             
A.   裂解液(lys)               2×1.0 ml                
B.   TRAP混合物(TRAP-mix)     1×0.6ml
C.   酶(E)                     1×8μl                    
D.   引物R(R-primer)           1×8μl
E.   阳性对照(control)         1×10μl
二、方法
1.取细胞105 _  106(组织50mg,匀浆或液氮冷冻捣碎),立即加裂解液100μl混匀,冰浴30min,4℃,16000g离心30min,取上清。
2.在反应管中依次加入以下组份:TRAP-mix  25μl;E  0.4μl;提取液 1μl(提取液蛋白浓度0.5~0.8μg/μl);混匀,30℃保温30min。
3.  在反应管中加入R-primer 0.4μl,混匀,加20μl石蜡油,按以下条件进行PCR扩增:变性94℃/30s;退火55℃/30s;延伸72℃/30s;循环30 次。
三、结果分析
在反应管中加5μl 6×DNA上样缓冲液,混匀,取30μl上样于12%非变性聚丙烯酰胺凝胶,1×TBE条件下电泳,银染,出现间隔6bp梯形条带者为阳性。
四、银染方法
1.将凝胶用5倍凝胶体积的固定液(10%乙醇和0.5%乙酸)浸没,充分振荡3分钟。
2.向固定液中加入硝酸银溶液至终浓度为0.2%,振荡染色5-10分钟。
3.将凝胶用超纯水振荡洗涤2~3次,每次30秒,倾干水份。
4.将凝胶转移到5倍凝胶体积的显色液(含3.0%氢氧化钠和0.1%甲醛)中,振荡,直至所有条带出现,一般约需3~10分钟左右。
5.将显色凝胶转至新的固定液中再固定5分钟,制备干胶或照相保存。
五、注意事项
1.操作过程中避免RNase污染,阳性对照避免反复冻融。
2.最好设置一管阴性对照。
3.用于银染的水必须是超纯的或是经过玻璃装置重蒸的双蒸水。
4.避免交叉污染。
5.-20℃,至少稳定6个月。
 
 
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温馨提示:不可用于临床治疗。
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